如何进行核酸提取

核酸提取的常见难点在于一些植物组织之所以比较难提取出高质量的RNA与这些植物组织中富含的一些成份有关,常见的有酚类化合物,多糖以及某些尚无法确定的次级代谢产物,另外还有就是富含较高活性的组织。在完整的细胞内,这些物质与核酸是分离的,一旦细胞破碎,这些物质就会与RNA相互作用。

核酸提取方法:

1、迅速灭活内源的RNA酶,以防止RNA降解。以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活:

1)用含离液(如胍盐)的细胞裂解液收获样品,并立即匀浆。

2)用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是:组织块必须保证足够小,在浸入液氮的瞬间就能冻结,以确保瞬间令RNA酶失活。

3)立即将样品置于无液氮RNA样品储存液中。它是一种水相、无毒的收集试剂,能立即稳定并保护完整、未冻结的组织和细胞样品中的RNA。关键要点是组织样品切片一定要够薄(<0.5 cm),这样才能在RNase破坏RNA之前迅速渗入组织块中。

2、使用正确的细胞或组织储存条件

在样品用液氮瞬间冻结之后,应该储存在-80°C,千万不能解冻。即使是置于含有胍盐的裂解液中作匀浆前的短暂解冻,也会导致RNA的降解和损失。瞬间冻结的组织应该先在超低温条件下先研磨成粉,然后置于裂解液中进行匀浆。

 

Manual nucleic acid extraction kit

3、选择好的RNA分离方法

现有众多的RNA分离方法也许令人难以取舍。目前简单也是安全的方法是柱式分离,如因为操作简单,时间短,纯度高而受到大家的喜爱,不需要DNA酶消化DNA,节省了时间,避免RNA的降解,从而提高了核酸提取产量;相对非柱式分离,去除蛋白及其他杂质干净,提高了纯度,对于细胞、组织、一般植物均非常适合。植物核酸提取比较难抉择,植物RNA提取受酚、多糖、蛋白杂质、次生代谢物含量的影响,可以选择多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(水仙、辣椒、胡萝卜、玉米、百合、小麦、西红柿、花菜、油菜等)和通用植物RNA提取试剂盒(适合绝大多数植物提取,包括:苹果、葡萄、草莓、香蕉、龙眼、荔枝、草坪植物、松树、杉树、白桦、紫松果、彩叶草、一品红、夹竹桃、垂叶榕、紫罗兰、月季、天竺蓝、牵牛花等);非常值得一提的是血液(包括血清、血浆、脑脊液、其他液体)核酸提取用TRIZOL和红细胞裂解的方法效果都不好,红细胞裂解液不含有RNA酶的抑制成分,这个过程RNA很容易降解,推荐使用血液总RNA提取试剂盒。

核酸提取系统在做分离实验时的注意事项有哪些?

核酸提取系统是使用通用磁珠法提取核酸的高科技产品,具有自动化程度高,提取速度快,结果稳定,操作简便的优点。几乎在每个实验室,与生物分子相关的分离纯化工作都是十分重要的。

但要对多个样品进行纯化还是相当困难的,不仅需要选择合适的纯化技术,而且工作量也特别大,很难满足当前飞速发展对高通量样品进行提取纯化的需求。

而磁珠法核酸提取系统,非常适合于基因组学的研究。无论提取样本的来源是微生物、动物、植物或是病毒,结合特别针对磁珠提取纯化系统优化的全血基因组DNA提取试剂盒、白细胞层全血基因组提取试剂盒、动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒,可以快速的纯化出足够数量和纯度的DNA或RNA.

HERO96 magnetic bead method nucleic acid extraction system

 

我们在使用核酸纯化仪进行分离实验时应注意些什么呢? .

1、保证核酸一级结构的完整性

2、去除其它生物大分子的污染(蛋白、糖类、脂类分子)。

3、去除其它核酸分子的污染(提取DNA,去除RNA污染)。

4、去除对酶有抑制作用的有机溶剂和高浓度金属离子。

5、简化操作步骤缩短提取过程。

HERO 32 Magnetic Bead Method Nucleic Acid Extraction System

6、防止物理、化学因素(剪切力、高温、强酸强碱)对核酸的降解。

7、防止生物因素(核酸酶)对核酸的降解,

核酸纯化仪测量结果稳定,避免人工操作引起的差异及错误,结果温度,重复性好。该纯化仪可根据试剂优化提纯方案,配合精确的温育时间,实现了更高的提取效率,提取的DNA/RNA纯度高,可以直接用于PCR和RT-PCR.

本产品拥有强大的程序编辑功能;灵活、高效地定义您的应用,可满足不同试剂要求。可根据需求自定义裂解、洗脱温度。内建工程用电脑,无需再连接个人电脑;单机操作节省更多的空间与能源,并提供高稳定度的自动化控制系统。

基础磁珠常见问题及回答

磁珠是近年来新发展的一种免疫学技术,将固化试剂特有的优点与免疫学反应的高度特异性结合于一体,以免疫学为基础,渗透到病理、生理、药理、微生物、生化以及分子遗传学等各个领域,并且在免疫检测、细胞分离、生物大分子纯化和分子生物学等方面得到了越来越广泛的应用。磁珠常见种类有羟基磁珠、氨基磁珠和羧基磁珠等,不同种类的磁珠有着不同的应用问题。下面,爱森小编为大家分享一下基础磁珠常见问题以及这些问题的答案吧。

一、羟基磁珠常见问题

1、各型号磁珠的分散性如何

70301 Mag OH-500粒径均一,单分散;

70302 Mag OH-1000无定形,粒径不均一,平均粒径1微米,多分散;

70802 Magrose OH球形,粒径30-150微米,多分散。

2、核酸结合能力多少

结合力大于20μg DNA/mg磁珠。

3、Magrose OH的使用领域

进行Magrose OH磁珠的表面改性,用于蛋白纯化领域。

4、羟基磁珠用于核酸提取是否有使用说明

羟基磁珠进行核酸提取需要根据不同的样本搭配不同的缓冲液,因此无相关说明,需要客户自己选择缓冲液。如果需要配套试剂盒可以选择相关的核酸提取试剂盒。

二、氨基磁珠常见问题

1、15%戊二醛溶液配制方法及注意事项

戊二醛采用PBS缓冲液,注意现配现用。

2、生物配体例如IgG怎么处理

IgG采用PBS缓冲液配制。若含有其他羧基或氨基小分子尽量去除,避免与磁珠竞争反应。

三、羧基磁珠常见问题

1、抗体偶联量是多少

约2.5-3μg/mg磁珠。

2、羧基磁珠偶联IgG后,磁珠保存液使用哪种更适合

保存液可以选择PBST或者tris-HCl。

以上就是基础磁珠常见问题及回答的相关内容介绍,不同的磁珠在应用过程中总会遇到各种各样的问题,要了解简单的各类磁珠应用方法及技巧,保证磁珠正常使用。爱森生物科技生产的磁珠品种多样,性能优异,欢迎有需要的客户致电咨询。

核酸检测的准确率有多高?

常用的传染病化验检查包括微生物培养、病毒分离、核酸检测、抗体检测等。核酸检测也是检测病毒的方法,它可以更早发现感染。现在临床中对乙肝、丙肝、艾滋病都开展了核酸检测,可以在抗体产生前检测到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通过咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸检测来判断是否感染,以及推测是否具有传染性。季节性流感、禽流感、冠状病毒感染等通过咽拭子检测可以方便地判断出上呼吸道是否存在病毒成份,从而判断被检测者是否属于感染者。那么,核酸核酸检测的准确率有多高呢?

目前还没有确切的大样本统计数据证明核酸检测的准确率,但影响准确率的因素比较多,例如检测试剂的质量水平、受检测人员感染时间(过早或者过晚都会降低准确率)、标本取材时受检测者配合情况(配合度差可能导致标本没有取到位)以及检验人员的操作熟练程度等。

Criminal Case Detection

如果核酸检测的各个环节都能准确无误,理想状态下核酸检测准确率可以达到95%以上。但是由于各种原因,会出现假阴性的结果。所谓假阴性,就是指受测试者确实是感染者,但是核酸检测结果却为阴性,这就是假阴性。随着技术水平提高,各个医疗机构的准确率都在迅速提高,假阴性率正在不断降低。

另外,对于和确诊病例、疑似病例有过密切接触的人员,通常需要两次核酸检测才能排除。对于去过新冠病毒中高风险地区的人员,如果出现发热和呼吸道症状,一次核酸检测阴性存在假阴性可能,所以也需要两次核酸检测才能排除。除此之外,如果医生判断一次核酸检测阴性仍不能排除的,也需要再次检测核酸,有时候医生还会建议做胸部CT、血常规化验和新冠病毒的血清抗体检测来判断是否感染。

常见磁珠优势性能及用途

优质的磁珠具有尺寸分布均一、表面负载量高、极短的磁响应时间、高的分散稳定性等特点,可以快速、高效地从样本中分离出待测物,极大地提高检测效率。并且磁珠分类较多,不同的磁珠具有不同的优势性能,用途也有所不同。下面,爱森小编为大家分享一下常见磁珠优势性能及用途的相关知识吧。

羧基磁珠优势性能及用途

1、优势性能

(1)可通过EDCNHS活化方式与蛋白质、核酸.链霉亲和素、多肽、酶等生物分子进行偶联;

(2)1μm大小,尺寸均一,表面具有颗粒状粗糙度,比表面积高,具有极高的羧基负载量,低的非特异性吸附能力;

(3)具有超顺磁性、磁响应速度快、单分散性好、可确保反应均一性及检测一致性;

(4)具有高亲水的表面及良好的生物相容性;

(5)优良的悬浮性,半沉降速度慢,适合于自动化操作。

2、用途

化学发光、基因捕获、蛋白纯化、细胞分选。

链霉亲和素磁珠优势性能及用途

1、优势性能

(1)可即刻用于生物素化蛋白质、核酸、多糖、脂类、酶等生物分子的偶联;

(2)1μm大小,尺寸均一,表面具有颗粒状粗糙度,比表面积高,具有极高的链霉亲和素的负载量及生物素化蛋白/核酸的偶联率;

(3)表面修饰亲水性多聚物分子及共价偶联多层链霉亲和素,链霉亲和素在表面吸附致密,表面暴露位点少,极大程度地降低了非特异性吸附;

(4)具有好的悬浮性,在pH (3.0-9.0) 内稳定,可用于自动化高通量实验操作。

2、用途

化学发光、蛋白、核酸分离。

氨基磁珠优势性能及用途

1、优势性能

(1)可通过多种偶联方式与蛋白质、核酸、多糖、脂类、酶等生物分子进行偶联;

(2)1μm大小,尺寸均一,表面具有颗粒状粗糙度,比表面积高,具有极高的氨基负载量;

(3)具有超顺磁性、磁响应速度快、单分散性好、可确保反应均一性及检测一致性;

(4)具有高亲水的表面及良好的生物相容性;

(5)优良的悬浮性,半沉降速度慢,适合于自动化操作。

2、用途

化学发光、细胞、病毒、核酸、抗体分离纯化。

以上就是常见磁珠优势性能及用途相关介绍。不同的磁珠有着不同的优势性能,用途也有所差异,要根据其性能特征选择适用的磁珠,爱森生物科技生产的磁珠品种丰富,性能优异,欢迎有需要的客户致电咨询。

磁珠法核酸提取原理是什么 ?

随着基因诊断、转基因食品检测、个性化医疗等的快速发展,现在的核酸提取技术已经不能够满足当今生物技术的需要,急需能够高通量、自动化的核酸提取方法。在这种背景下,磁珠法核酸提取应运而生。

磁珠用于DNA提取是其生物学价值最大化的领域之一,主要使用的微球种类包括硅羟基磁珠和oligo磁珠。带有表面基团的磁珠能与检测样本中释放的核酸进行特异性可逆结合。同时利用磁珠自身具备的磁响应能力,在外加磁场的作用下进行定向移动与富集,从而实现对核酸的分离纯化。磁珠法核酸提取主要的优点包括操作简单自动化、可大批量操作、用时短。

1、什么是磁珠

磁珠是一类特殊的纳微米材料,它们的尺寸通常在零点几微米到几微米之间,仅为一根头发丝直径的十几分之一到几十分之一,肉眼是无法观测到单个磁珠的。它们具有超顺磁性,在磁场中可以向一侧迅速移动,聚集在一起,而去除磁场后又能够迅速恢复到分散状态。

用于核酸提取的磁珠表面具有特定的性质,在某些条件下能够将病毒核酸吸附在表面,在另一些条件下又能将病毒核酸从表面释放下来,用于后续的检测步骤。

2、磁珠法核酸提取的原理

核酸结合到磁珠上主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用。细胞或组织在裂解液作用下,其中的DNA/RNA被释放出来。此时经过表面修饰的超顺磁性氧化硅纳米磁珠即与核酸进行”特异性结合”,形成“核酸-磁珠复合物”。然后在外加磁场的作用下,复合物即分离出来。经过洗脱液洗去非特异性吸附的杂志、去盐、纯化后,即得到欲提取的核酸物质。

依据与硅胶膜离心柱相同的原理,运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。利用氧化硅纳米微球的超顺磁性,在Chaotropic盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下,能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA,可应用在临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。

事实上,由于检测机构每天需要处理大量样本,大都是采用自动化核酸提取仪配套磁珠法核酸提取试剂盒的方式进行核酸提取步骤。

磁珠法核酸提取影响因素有哪些?

近两年随着病原体检测热度攀升,病原体核酸检测逐步走入人们视野,成为病原体检测的金标准。面对大批量样本,短时间内需要出具检测结果,人们对快速、高效检测方法的需求越来越迫切。而核酸提取作为核酸检测的重要步骤,也面临着通量和高效率的要求。全自动核酸提取(磁珠法核酸提取)因其具有快速高效、简单易用以及安全无毒等特点迅速得到推广应用,成为实验室的标配。不过,在提取过程中,某些因素会影响到提取结果,需要操作人员注意。爱森小编为大家整理了磁珠法核酸提取影响因素的相关知识,就分享给大家吧。

磁珠法核酸提取由裂解、洗涤和洗脱等步骤组成,影响这些步骤的因素同样也会影响磁珠的提取效率。下面我们对每一个步骤进行逐一解释。

  一、裂解步骤影响因素

  1、裂解液成分

对于一些难裂解的样本,可以通过提高胍盐浓度以及表面活性剂浓度来增强裂解液的裂解能力。胍盐和表面活性剂可以促使蛋白变性,破坏细胞膜,使核酸和蛋白解离,从而释放更多的核酸。

  2、裂解温度和时间

提高温度和增加裂解时间可以让细胞裂解更彻底,得到更多核酸,需要摸索合适的温度和时间;温度过高或时间过长,也有可能导致核酸断裂或醇类挥发导致的提取效率下降。

  3、磁珠吸附能力

磁珠提取系列磁珠一般是硅羟基磁珠,磁珠吸附能力受到磁珠比表面积以及修饰基团的密度影响。一般选择修饰基团多,比表面积大的磁珠,一般磁珠粒径越小,比表面积越大。但也不是磁珠粒径越小越好,磁珠粒径小,吸附速度也会变慢,可根据实际样本情况自行选择。结合缓冲液一般用异丙醇或乙醇结合。通常可以通过提高醇的比例来增强结合能力,同时也要提高离液盐的浓度来促进核酸与磁珠的结合。

  二、洗涤步骤影响因素

洗涤对于整个提取步骤至关重要,关系到核酸的纯度,核酸的纯度直接影响下游PCR应用。磁棒的振荡幅度和混合时间会影响洗涤效率。

  1、磁棒振荡幅度

磁棒振荡幅度太小,就有杂质残留在磁珠上会影响磁珠吸附核酸的能力;振荡太剧烈,会丢失部分核酸或造成核酸的断裂、降解,得率下降。

  2、混合时间

混合时间太短,就有杂质残留在磁珠上会影响磁珠吸附核酸的能力;混合时间太长,会丢失部分核酸或造成核酸的断裂、降解,得率下降。

COVID-19 Virus Nucleic Acid Extraction Kits & System

  三、洗脱步骤因素影响

洗脱步骤直接影响核酸得率,影响洗脱效率的因素有磁珠的干燥程度以及洗脱温度和时间。

  1、磁珠干燥程度

磁珠未充分晾干,可能会有醇类等杂质残留,影响后续PCR反应;磁珠过分干燥,核酸可能会干结在磁珠上,导致洗脱效率下降。

  2、洗脱温度和时间

适当提高洗脱温度和时间,有利于核酸从磁珠上游离下来,时间过长或温度过高,核酸有可能会降解,需要把握其中的平衡。

关于磁珠法核酸提取影响因素有哪些的相关内容即是上文所述,在进行磁珠法核酸提取时要确保上述因素合理,这样提取质量也能更好。爱森生物科技在核酸提取系统及核酸提取试剂盒生产方面有丰富经验,采用优质工艺,质量可靠,欢迎有需要的客户致电咨询。

磁珠法核酸提取步骤及原理

随着生物医学的不断发展,核酸提取技术也在更新换代,磁珠法核酸提取作为新型核酸提取技术,能够高通量、自动化提取核酸,满足当今生物技术的需要。另外,磁珠法核酸提取的步骤较为简单,操作方便,受到好评。下面,爱森小编为大家分享一下磁珠法核酸提取步骤及原理吧。

磁珠法核酸提取步骤

1、每支40mg规格的蛋白酶K干粉中加入1 mL去离子水至终浓度40mg/mL,每支20mg规格的蛋白酶K干粉中加入500 μL去离子水至终浓度40mg/mL,颠倒混匀十次使其完全溶解,短期使用可于4℃保存,长期储存请置于-20℃,反复冻融不得超过五次。

2、组织样本取10~30 mg液氮研磨至细粉状,转移到1.5 mL离心管中,加入200 μL 1 X PBS缓冲液重悬,然后进行下一步操作。液体样本直接进行下一步操作。

3、取500μL的病毒裂解液VL加到1.5mL的无酶离心管中,然后加入25μL蛋白酶K和25μL的病毒磁珠(加入前摇匀),再加入200μL的血清/血浆/组织匀浆液样本,涡旋振荡混匀,55%C水浴20min,期间每隔5min颠倒混匀10s。

4、取出水浴的无酶离心管,放置到磁力架上,磁吸90s使磁珠完全吸附,用移液器小心吸弃上清(注意不要吸到管底的磁珠)。

5、从磁力架上取下离心管,加入700μL的漂洗液BufferA ,吹打混匀或者涡旋混匀30s ,使磁珠重悬,然后将离心管放置到磁力架上,磁吸90S使磁珠完全吸附,用移液器小心吸弃上清。

6、取700μL的漂洗液BufferB,加到离心管中,尽量不要吹散磁珠,然后直接吸弃上清。

7、加入80μL的洗脱缓冲液,取下离心管,56℃水浴5min,期间涡旋3-4次,使核酸从磁珠上洗脱下来。

8、把离心管放置到磁力架上磁吸60s,将液体转移至一个新的1.5mL的无酶离心管中,直接进行下游实验或-20℃保存。

HERO 32

磁珠法核酸提取原理

其原理主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用。细胞或组织在裂解液作用下,其中的D NA/RNA被释放出来。此时经过表面修饰的超顺磁性氧化硅纳米磁珠即与核酸进行“特异性结合”,形成“核酸-磁珠复合物”。然后在外加磁场的作用下,复合物即分离出来。然后经过洗脱液洗去非特异性吸附的杂质、去盐、纯化后,即得到欲提取的核酸物质。

上述即是磁珠法核酸提取步骤及原理相关介绍,爱森生物科技生产的磁珠及核酸提取系统性能优异,质量可靠,欢迎有需要的客户致电咨询。

什么是纳米磁珠技术?

纳米磁珠是指大小适合用纳米来衡量的小磁性微粒,一般是指1—100纳米,这类磁珠具有一种很特别的磁性叫超顺磁,即在外加磁场中有较强的磁响应性,而撤去磁场后,磁性微粒的磁性马上消失,也就是没有剩磁,重新均匀分散于溶液中。传统的DNA分离技术包含沉淀,离心等过程,这些纯化方法的步骤繁杂、费时长、收率低,接触有毒试剂,很难实现自动化操作;而采用磁性载体微球分离技术就能很好地克服这些缺点,实现样品地快速、高效制备。因此纳米磁珠技术是未来DNA纯化方法发展的一个重要方向。

 

什么是纳米磁珠

所谓纳米磁珠是指大小适合用纳米来衡量的小磁性微粒,一般是指1—100纳米,这类磁珠具有一种很特别的磁性叫超顺磁,即在外加磁场中有较强的磁响应性,而撤去磁场后,磁性微粒的磁性马上消失,也就是没有剩磁,重新均匀分散于溶液中。

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科学家所青睐的便是这一特性,可以用来吸附液体中的某种成分,然后通过磁性分离磁珠来达到分离成份的目的。当然为了能够吸附所要的物质,在颗粒的外面必须包裹有特异性的基团,如氨基、羟基、羧基、巯基等功能基团,通过这些集团和目的分子进行特异性的结合,然后通过磁力收集磁珠,就可以把所需要的物质分离出来。

磁珠本身多数是无机材料,最常见的材料是四氧化三铁,外面包被的基本是有机材料。根据磁珠本身和包被材料的位置关系来区分磁珠的结构有四种,即核壳型、镶嵌型、壳核型、壳核壳型。

 

其中第一种核壳型被研究和运用最多,其磁性材料作为核心,高分子物质作为壳层包裹在磁性微粒的外面,处于核心的无机磁性材料赋予了整个微粒的超顺磁性,也即可分离性,处于壳层的高分子物质赋予了整个微粒的高效吸附性,也即特异性。在充分混合均匀的液体环境中,高分子壳层通过其官能集团与目标物质结合,通过外加磁场控制整个颗粒的移动和收集,最终达到目的物质分离的目的。

 

磁珠用于DNA提取是其生物学价值最大化的领域之一,主要使用的微球种类包括硅羟基磁珠和oligo磁珠。带有表面基团的磁珠能与检测样本中释放的核酸进行特异性可逆结合。同时利用磁珠自身具备的磁响应能力,在外加磁场的作用下进行定向移动与富集,从而实现对核酸的分离纯化。磁珠法核酸提取主要的优点包括操作简单自动化、可大批量操作、用时短。

 

磁珠法核酸提取中的6个误区

使用生物磁珠提取核酸,是一种新颖的核酸提取方式,相比于传统的氯仿、异戊醇抽提法和离心柱试剂盒法,这种方法还有很多人不慎了解,在使用磁珠法提纯核酸的过程中,也存在着一些误区。

误区一、磁珠越多,提取效果越好

有人觉得在提取效果不佳的时候,增加磁珠的用量,认为磁珠多加一点,就能吸上更多的核酸,其实这种想法是不可取的。

磁珠的主要特点是既可以分散于液体中,也可以在外加磁场作用下以固态方式和液相分离,任何试剂体系,磁珠和液体的比例都应该是有一定数值的,超过一定的比例,过多的磁珠将因为无法均匀分散于液体中,而丧失其分散的特性,也使得洗涤过程中无法充分增加核酸磁珠和液体接触的效率。

而过量的磁珠也会吸附更多的杂质,对于除杂的效果影响非常大。甚至有些时候,过多的磁珠会吸附蛋白酶、溶菌酶等在液体体系中起主要作用的功能成分,导致整个试剂盒效率低下。有很多时候,在提取效果不佳的时候,减少磁珠使用量,反而是提升提取效果的最优途径。

通常情况下,磁珠法试剂盒给出的参考磁珠用量都是略微过量的,因此需要增加磁珠用量改善吸附效率的情况并不多,但如果确定是磁珠用量不足导致的提取效果不好,是可以在一定范围内通过增加磁珠用量来改善提取效果的。

误区二、试剂使用的越多,提取效果越好

但是对于磁珠法而言,每增加一部分液体体积,就减少了更多的磁珠碰撞几率,而降低磁珠碰撞几率,会导致吸附率的大幅度下降。所以很多时候,虽然增加裂解液和洗涤液确实能够起到增强裂解和增强洗涤的作用,但磁珠法提取的核心是磁珠吸附核酸的效率,无法保证磁珠碰撞效率是不能保证核酸提取效率的,所以单纯增加试剂使用量改善提取效果并不一定完全有效。

误区三、洗涤次数越多,提取效果越好

提取得到的核酸杂质过多时,使用者会考虑多进行几次洗涤,以得到更为纯净的核酸。增加洗涤次数确实有利于提纯核酸,但考虑到每次洗涤都会损失一定量的核酸,且增加了核酸断裂水解的可能性,所以一般来说洗涤次数控制在2~4次为宜。

Scientific Research

误区四、样本取用的越多,提取效果越好

在样本不够新鲜或者核酸含量本身就很少的情况下,往往核酸提取效果不好,很多老师就会采用多取样本的方式增加核酸提取量。

但简单地增加样本取样量,有时会引入过多的杂质,超出裂解液裂解能力,也会使提取效率降低,所以并不推荐通过简单的增加样本取样量的方式来达到增加提取量的目的。

如果确实是由于样本量不足而引起的提取量过低,建议在前处理先经过富集或者浓缩步骤再开始提取。或者增加裂解的完全性,使更多的核酸暴露出来也是一种解决方法。

误区五、某一种磁珠好,就应该在所有试验中效果都好

磁珠的种类是多种多样的,粒径大小不同,分散性不同,磁响应时间不同,包被基础基质不同,外层修饰官能团不同,包被密度不同,官能团臂长不同,会导致磁珠特性千差万别。

所以不同磁珠所适应的实验和体系也是不同的。就像同样是核酸提取的试剂,配方也并不完全相同,同样应用于核酸提取的磁珠,性质也并非完全一致。

有的磁珠在常量核酸提取中表现出了更高的吸附效率,有的磁珠更适用于微量核酸提取。有的磁珠适合偏酸性系列的试剂体系,有的磁珠适合偏碱性系列的试剂体系。有的磁珠磁响应性好但是沉降速度快,更适合磁棒式自动提取仪;有的磁珠沉降速度慢但是磁响应时间长,更适合移液式自动提取仪。

很少有一种磁珠能适用于所有实验的情况,除了固定的试剂盒配合,多数情况下,磁珠和试剂体系都要做一定时间的配合调整。

误区六、和某种试剂盒对比效果不好,就是磁珠不好

很多客户在筛选磁珠过程中都是在已经成熟试剂体系下,简单地等量替换磁珠,用于比较磁珠效果。

这样就会很容易得出某种磁珠效果不好的结论,但实际上,由于不同磁珠适合的体系和用量是不同的,往往需要调整过后才能获得更好的提取效果。